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如何選擇合適的內(nèi)參抗體？

如何選擇合適的內(nèi)參抗體？Tips：在選擇內(nèi)參抗體時(shí)，我們需要遵循幾個(gè)原則：1.種屬來(lái)源哺乳動(dòng)物的樣本需要選擇哺乳動(dòng)物中穩(wěn)定表達(dá)的蛋白作為內(nèi)參，同樣的，植物樣本需要選擇植物中穩(wěn)定表達(dá)的蛋白作為內(nèi)參。2.細(xì)胞定位靶標(biāo)蛋白的細(xì)胞定位不同，適合的內(nèi)參也不同。如全細(xì)胞裂解液可選擇beta-actin、beta-tubulin等，膜蛋白一般選擇NaKATPase，核蛋白則選擇LaminB1、HistoneH3等。3.分子量?jī)?nèi)參蛋白的分子量需要與目標(biāo)蛋白的分子量有所區(qū)別，否則兩者條帶無(wú)法分...

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TUNEL法細(xì)胞凋亡檢測(cè)假陽(yáng)性率高怎么破？

TUNEL法基于對(duì)細(xì)胞DNA損傷的檢測(cè)，通?？捎糜跈z測(cè)組織切片樣本和細(xì)胞樣本，是晚期細(xì)胞凋亡檢測(cè)中常用的方法。那么對(duì)于檢測(cè)過(guò)程中常見的假陽(yáng)性率高的現(xiàn)象是如何產(chǎn)生的呢？1.固定操作不當(dāng)固定液選擇不恰當(dāng)，固定液濃度過(guò)高，固定時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，組織切片過(guò)厚都會(huì)影響固定效果。一般建議選擇含4%多聚甲醛的PBS溶液來(lái)固定細(xì)胞或組織切片，時(shí)間在30min左右。2.基因轉(zhuǎn)錄水平高基因轉(zhuǎn)錄活性高的非凋亡細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性，例如睪丸組織。3.激發(fā)光下長(zhǎng)時(shí)間照射在強(qiáng)激發(fā)光長(zhǎng)時(shí)間照射下，高濃度的PI會(huì)吸收能...

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原代細(xì)胞分離與培養(yǎng)

原代細(xì)胞(primarycell)是指從生物體獲取細(xì)胞直接培養(yǎng)。通常，把培養(yǎng)的第1代細(xì)胞與傳10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。由于細(xì)胞剛從活體組織分離出來(lái)，因此原代細(xì)胞更接近于生物體內(nèi)的生活狀態(tài)，且生物性狀尚未發(fā)生很大改變。這一方法可為研究生物體細(xì)胞的生長(zhǎng)、代謝、繁殖提供有力的手段，同時(shí)也為以后傳代培養(yǎng)創(chuàng)造條件。原代細(xì)胞的分離與培養(yǎng)常用的原代細(xì)胞培養(yǎng)方法有組織塊培養(yǎng)和分散組織培養(yǎng)。組織塊培養(yǎng)：是將剪碎的組織塊直接移植在培養(yǎng)瓶壁上，加入培養(yǎng)基后進(jìn)行培養(yǎng)。組織塊培養(yǎng)法是常用的、...

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